BMSCs常見的分離方法有密度梯度離心法、貼壁法以及免疫磁珠分選法，大家可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室條件來選擇合適的分離方法。

將裝有大鼠骨髓液的15 mL離心管，1500 rpm離心5 min；棄上清，用完-全培養(yǎng)基重懸沉淀；將培養(yǎng)基重懸的細(xì)胞懸液緩慢滴加到Percoll分離液（用PBS稀釋）上方，形成密度梯度分離液；2000~2500 rpm離心25 min，吸取中間層的白色霧狀細(xì)胞層，加入PBS清洗細(xì)胞，1800 rpm離心5 min；棄上清，保留細(xì)胞沉淀；用細(xì)胞完-全培養(yǎng)基重懸沉淀，將細(xì)胞懸液按1×10⁶/mL密度接種于T25瓶中，于37℃，5%CO₂恒溫培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。首-次2 d換液，棄去未貼壁細(xì)胞, 此后每2~3 d換液一次；待細(xì)胞融合達(dá)80%后, 用胰酶消化1~2 min后傳代培養(yǎng)。

也稱全骨髓培養(yǎng)法或一步法。將收集的骨髓懸液經(jīng)200目篩網(wǎng)過濾后，用完-全培養(yǎng)基制成單細(xì)胞懸液；培養(yǎng)48 h首-次換液，棄去未貼壁細(xì)胞；此后每2~3 d換液一次，觀察細(xì)胞的生長及融合程度，待細(xì)胞融合80%以上后開始傳代培養(yǎng)。

免疫磁珠法和流式細(xì)胞儀分選法通過識別細(xì)胞表面特異性抗原分離細(xì)胞，可獲得純度較高的細(xì)胞，但對細(xì)胞的活性影響較大，獲得的細(xì)胞量少，需要特殊的儀器，實(shí)際應(yīng)用受限。