如何培養(yǎng)原代小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞？

　　小鼠骨髓基質(zhì)系統(tǒng)內(nèi)存在的小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞是一種除造血干細胞以外的、具有多向分化潛能的干細胞，可以向骨、軟骨、肌組織、皮膚、脂肪、神經(jīng)等多種組織分化，因此可以作為組織工程中的種子細胞。那么它是如何培育的呢？

　　
 

　　1、材料

　　

　　成年小鼠4只、胎牛血清、L-DMEM、胰蛋白酶、PBS、Percool細胞分離液、雙抗、8%碳酸氫鈉溶液。

　　

　　2、儀器

　　

　　倒置顯微鏡、CO2恒溫培養(yǎng)箱、超凈工作臺、生物顯微鏡、低溫高速離心機、無菌操作臺、血球計數(shù)板、6孔培養(yǎng)板。

　　

　　3、方法

　　

　　骨髓收集→Percoll密度梯度離心法分離純化骨髓間充質(zhì)干細胞→貼壁培養(yǎng)→形態(tài)學觀察→原代培養(yǎng)細胞

　　

　　注：原代培養(yǎng)時胎牛血清比例可適當提升，可以提高細胞成活率。

　　

　　4、結果

　　

　　（1）骨髓間充質(zhì)細胞的形態(tài)學觀察

　　

　　24h后就見有細胞貼壁，多數(shù)細胞呈圓形。72h后半量換液去除未貼壁細胞，此時貼壁的細胞為單個，形態(tài)大部分為圓形。第一次換液后5~7天可見由幾十個到數(shù)百個細胞組成的集落，細胞形態(tài)呈梭形、三角形、星形。原代培養(yǎng)10天左右，細胞快速增殖，每個集落中的細胞不斷增殖呈長梭形放射狀排列。培養(yǎng)2周左右，每個小集落形成約數(shù)百至上千個細胞的大集落，集落交界處出現(xiàn)重疊、融合。

　　

　　（2）骨髓間充質(zhì)細胞的生長曲線

　　

　　生長曲線表明BMSCs的增殖能力很強，所測細胞在開始的前4天里生長緩慢處于潛伏適應期，第5天開始迅速增長進入對數(shù)生長期，到第9天細胞數(shù)輕度上升，第10天達到頂點，生長速度減緩進入平臺期。